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CD8+CD28-T细胞与胰腺癌患者肿瘤标记物、生存期及治疗的关系

发布时间:2016-8-4      来源:admin      阅读次数:525

敖永曦,张启洪,伍时佐,郑俏聪,李丹,吴盛,许云朋,谢小娥

(阳江市人民医院肿瘤科,广东 阳江,529500)

摘要:目的:探讨CD8+CD28-T细胞与胰腺癌患者肿瘤标记物、生存期及治疗的关系。方法:以25例胰腺癌患者作为观察对象,以23例慢性胰腺炎及32例健康人作为对照,采集外周血进行CD8+CD28-T细胞及其细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)及白介素10(IL-10)百分含量检测。对胰腺癌患者进行治疗,分别在治疗后第4、8及12周检测外周血CD8+CD28-T细胞、TGF-β1、IL-10及CA199含量,并分析胰腺癌患者CD8+CD28-T细胞及细胞因子与生存期及CA199的关系。结果:胰腺癌组患者CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者均显著高于慢性胰腺炎及健康对照组(P<0.05),而后两组之间无统计学差异。治疗后第4周CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10与治疗前无统计学差异,但第8周与第4周有显著性差异,亦即明显降低(P<0.05)。第12周与第8周同样无统计学差异。CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者当中任意一者与生存期呈负相关性,但与CA199呈显著正相关性(均为r绝对值大于0.7,P<0.05)。结论:CD8+CD28-T细胞及其细胞因子升高是胰腺癌的特征之一,随着治疗进展其可一度下降,但治疗后期下降不显著;该细胞与生存期及肿瘤标记物密切相关,因而具有重要临床意义。

关键词:胰腺癌;CD8+CD28-T细胞;肿瘤标记物;生存期

 

Relation of CD8+CD28-T cells with CA199, survive time and treatment for patients with carcinoma of pancreas

Yongxi AO, Qihong ZHANG, Shizuo WU, Qiaocong ZHENG,

Dan Li, Sheng WU, Yunpeng XU, Xiaoe, XIE

(Department of Oncology, Yangjiang Hospital, Yangjiang 529500, Guangdong, China)

Abstract: objective: to investigate the Relation of CD8+CD28-T cells with CA199, survive time and treatment for patients with carcinoma of pancreas.Methods: 25 patients with pancreatic cancer as research object, in 23 cases of chronic pancreatitis and 32 cases of healthy people as controls, with peripheral blood CD8 + CD28 - T cell growth factors and cytokines 1 (TGF - beta 1) and interleukin 10 (IL - 10) percentage content detection.Treatment of patients with pancreatic cancer, at 4, 8 and 12 weeks after treatment, respectively, to detect peripheral blood CD8 + CD28 - T cells, TGF - beta 1, IL - 10 and CA199 levels, and analysis of patients with pancreatic cancer CD8 + CD28 - T cells and cytokines and survival and CA199 in the relationship.Results: the group of CD8 + CD28 - T cells in patients with pancreatic cancer and TGF - beta 1 and IL - 10 were significantly higher than that of chronic pancreatitis (cp) and healthy controls (P < 0.05), and no statistical difference between two groups.4 weeks after treatment of CD8 + CD28 - T cells, TGF - beta 1 and IL - 10 and no statistical difference before treatment, but 8 weeks and 4 weeks have significant differences, which significantly decreased (P < 0.05).Week 12 and 8 weeks, also no statistical difference.CD8 + CD28 - T cells, TGF - beta 1 and IL - 10 either one of the three negative correlation with survival, but and CA199 were significantly positive correlations (r the absolute value is greater than 0.7, P < 0.05).Conclusion: CD8 + CD28 - T cells and cytokines rise is one of the characteristics of pancreatic cancer, along with the progress in its treatment also dropped, but late treatment no significant decline;The cells are closely associated with survival and tumor markers, and thus has important clinical significance.
Key words: pancreatic cancer;CD8 + CD28 - T cells;Tumor markers;The lifetime

胰腺癌多指发生于胰腺的外分泌腺体的恶性肿瘤,由于其发病隐匿,早期症状不具备特异性,故多数患者发现时属于晚期,这对预后构成严重威胁。关于胰腺癌的发病机制多数认为与基因突变(如K-ras)遗传因素、接触化学物质、饮酒、糖尿病等因素相关[1]。近年研究表明,免疫因素的异常是胰腺癌的一个新机制,且有研究表明调节性T细胞(Treg)升高在胰腺癌发病机制扮演重要角色,如CD4+CD25+Treg在胰腺癌患者升高,在接受高强度聚焦超声(HIFU)治疗后可下降[2]。同样作为Treg,CD8+CD28-T细胞是否也与胰腺癌的发病、治疗及预后相关?目前这方面的探讨较少。以此为创新点,本文探讨了胰腺癌患者CD8+CD28-T细胞及其细胞因子的表达,并探讨其与生存期及肿瘤标记物的关系,如下:

1 资料与方法

1.1 患者资料

选取2012年1月至2015年3月期间我科收治的胰腺癌患者作为观察对象,条件如下:经ERCP活检、上腹部增强CT、全身PECT、超声胃镜等确诊为原发性胰腺癌;无合并自身免疫性疾病或服用激素及免疫抑制剂等;排除继发性胰腺癌[3]。共收集患者25例,男性20例,女性5例,年龄43-74岁,平均(57.38±14.96)岁,其中胰头癌19例,胰体癌2例,胰尾癌4例,其中手术2例(均为胰尾癌)。发病到确诊3~11个月,平均(7.18±4.05)个月;其中我院首诊9例,外院首诊并初始治疗后16例(均在1月内返回我科继续治疗)。以我院消化科及普外科收治的23例慢性胰腺炎及体检中心的32例健康人作为标本对照,以上三组观察对象的性别构成及年龄均无统计学差异。

1.2 治疗方法

单纯氟尿嘧啶(5-FU)化疗2例;吉西他滨治疗2例;FAM联合化疗方案11例;冷冻治疗2例;单纯放疗3例;放化疗联合5例。分别在治疗后的第4、8及12周进行下述指标观察[4]

1.3 评价指标

1.3.1 CD8+CD28-T细胞及细胞因子检测

清晨空腹采集以上观察对象静脉血5ml,使用免疫磁珠法分离出CD8+CD28-T细胞[4]。使用固定穿透剂对胞内细胞因子TGF-β1及IL-10进行染色,使用BD公司生产的流式细胞仪的双激光光源,以CD8及CD28进行设门,进行CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10的检测, 每管获取细胞数1000个。运用FACSDIVA软件分析对三者的百分含量进行[5]

1.3.2 肿瘤标记物及生存期

对上述患者进行为期12周的随访,分别在治疗后第4、8及12周采血进行CA199的检测;并记录患者的生存期[6]

1.4 统计学方法

定量资料采用(±s)表示,采用方差分析LSD法进行三组间的两两比较,指标间的相关性分析采用Pearson参数法。使用统计软件包SPSS 15.0处理数据,当P<0.05认为是差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组间比较

与健康组比较,慢性胰腺炎患者CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10均稍升高大,但无统计学差异;胰腺癌组患者CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者均显著高于慢性胰腺炎及健康对照组(P<0.05)。

表1 三组CD8+CD28-T细胞及其细胞因子百分含量比较(±s)

 

分组

n

CD8+CD28-T细胞(%)

TGF-β1(%)

IL-10(%)

CA199(Ku/L)

胰腺癌组

25

4.68±2.17ab

2.89±1.28 ab

3.32±1.69 ab

63.28±42.17 ab

慢性胰腺炎组

23

1.47±0.62

0.96±0.32

1.25±0.47

6.38±3.29

健康组

32

1.25±0.51

0.81±0.27

1.03±0.38

4.17±2.31

F

 

2.631

2.282

2.419

7.125

P

 

0.019

0.033

0.026

0.002

与慢性胰腺炎组比较,aP<0.05;与健康组比较,bP<0.05。

2.2 治疗过程中的变化

以上25例胰腺癌患者有2例在确诊4-8周内死亡;4例在8-12周内死亡。治疗后第4周检测发现CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10与治疗前无统计学差异,但第8周与第4周有显著性差异,亦即明显降低(P<0.05)。第12周与第8周无统计学差异。

表2 治疗过程中胰腺癌患者CD8+CD28-T细胞及其细胞因子的变化趋势(±s)

 

分组

n

CD8+CD28-T细胞(%)

TGF-β1(%)

IL-10(%)

CA199(Ku/L)

第4周

25

4.21±2.03d

2.76±1.14 d

3.12±1.18 d

57.28±39.16 d

第8周

23

3.11±1.39c

2.03±1.01c

2.57±1.04c

38.39±24.07c

第12周

19

2.89±1.27

1.98±0.96

2.39±0.98

34.30±20.39

F

 

1.329

1.034

1.218

5.236

P

 

0.078

0.107

0.091

0.039

与第4周比较,cP<0.05;与第12周比较,dP<0.05。

2.3 相关性分析

CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者当中任意一者与生存期呈负相关性(均为r绝对值大于0.7,P<0.05);但与CA199呈显著正相关性(均为r绝对值大于0.7,P<0.05)。

表3 CD8+CD28-T细胞及其细胞因子与生存期及肿瘤标记物的相关性分析

 

指标

CD8+CD28-T细胞

 

TGF-β1

 

IL-10

r

p

 

r

p

 

r

p

生存期

-0.816

0.001

 

-0.751

0.012

 

-0.795

0.006

CA199

0.837

0.000

 

0.784

0.009

 

0.815

0.004

3 讨论

T细胞是指细胞膜表达CD3分子的一类淋巴细胞。根据功能不同,T细胞可大致分为CD4+辅助性T细胞(Th)及CD8+杀伤性T细胞(Ts)两大类。在CD8+ T细胞当中,根据是否表达CD28共刺激分子,可分为CD8+CD28+T细胞及CD8+CD28-T细胞两大亚群,前者主要是促进免疫杀伤,在抗炎及抗肿瘤机制发挥重要作用,而后者CD8+CD28-T细胞由于细胞膜不表达CD28分子,因而没有明显的杀伤作用但具有抑制或下调免疫的作用,该作用可致使免疫耐受而对肿瘤患者可能不利[7]。然而,目前关于CD8+CD28-T细胞与胰腺癌患者的关系的探讨较少,这对提高胰腺癌患者的疗效是不利的。细胞因子是免疫细胞分泌的重要蛋白质,在信号传导及和转录等过程中发挥重要角色,因而探讨一个免疫细胞的功能必须从细胞因子入手。TGF-β1及IL-10是CD8+CD28-T细胞分泌的两个最为重要的细胞因子,是该细胞发挥免疫抑制或上调双重功能的重要物质基础[8],因此笔者选取该两个指标作为切入点。

本研究发现,慢性胰腺炎患者CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10均稍升高,但与健康人无统计学差异,这说明慢性胰腺炎患者上述三指标并不显著升高;另一方面,胰腺癌组患者CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者均显著高于慢性胰腺炎及健康对照组,这与吉顺荣[9]等报道具有一致性;这说明三项指标同时升高,对于胰腺癌患者而言具有特异性,这初步提示三者的临床意义。为进一步探讨CD8+CD28-T细胞及其细胞因子与临床的关系,笔者观察了在治疗后12周内的变化,发现治疗后第4周检测发现CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10与治疗前无统计学差异,这提示在治疗因素,包括化疗及放疗等因素早期对该细胞的影响暂不显著,其原因可能是放化疗因素更多的是提高CD8+CD28+杀伤性T细胞的含量及活性,而相对CD8+CD28-抑制性T细胞的作用不明显。随着治疗的进展,第8周三者及CA199明显低于与第4周,其提示CD8+CD28-抑制性T细胞的活性被逐渐激活,从而发挥了免疫抑制作用[10]。但进展至第12周时,其与第8周并无统计学差异,当中的原因可能是:肿瘤进一步浸润导致免疫功能进行性受损,抗肿瘤机制失衡;放化疗因素无法激活CD8+ T细胞膜上CD28分子的表达,导致CD8+CD28+杀伤性T细胞含量下降,免疫杀伤不足而使CD8+CD28-抑制性T细胞的含量下降不明显[11]。相关性分析提示CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10三者与生存期呈负相关性提示三者越高,则生存期越短;但与CA199呈显著正相关性,提示三者含量越高,则肿瘤标记物含量越高,这进一步提示CD8+CD28-T细胞、TGF-β1及IL-10是胰腺癌患者的不利因素。

通过本研究笔者认为,CD8+CD28-T细胞及其细胞因子升高是胰腺癌的特征之一,随着治疗进展其可一度下降,但治疗后期下降不显著;由于该细胞及细胞因子与生存期及肿瘤标记物密切相关,因而具有重要临床意义。样本量较小、观察周期过短,是本研究的不足之处,将在后续研究中得以完善。

 

参考文献

[1] 耿文茂,张倩,苏忠学,等.胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素-2、-6、-7水平测定的研究[J].中华实验外科杂志,2012,29(8):1613-1615.

[2] 宋晓燕,马宁,姜振宇,等.原发性胰腺癌患者高强度聚焦超声治疗前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其意义[J].吉林大学学报:医学版,2013,39(4): 791-794.

[3] 陈炯,杜敏,李文波,等.胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞与IL-4、IFN-γ的关系[J].中华外科杂志,2009,47(13):995-998.

[4] 周刚,牛立志,邱大卫,等.冷冻消融治疗对胰腺癌患者细胞免疫功能影响的观察[J].中华肿瘤防治杂志,2011,18(24):1938-1941.

[5] 周茂华,吴长有.不同刺激剂和培养环境对CD4+、CD8+T细胞内细胞因子表达的影响[J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(2):168-171.

[6] 鲁琼等,血清IgG4和CAl99联合检测在自身免疫性胰腺炎和胰腺癌鉴别诊断中的意义.检验医学,2011(26):746-749.】

[7] 许文平,李志樑,邱健,等.腹主动脉瘤患者外周血CD4+ CD28-调节性T 细胞的变化及意义[J].中国普通外科杂志,2011,20(6):651-654.

[8] 宋吉杰,李文.56例胰腺癌患者围术期免疫系统水平变化研究[J].中国基层医药,2010,(11):1534-1535.

[9] 吉顺荣,姚宛彤,张波,等.胰腺癌患者外周血CD8+CD28+和CD8+CD28-T淋巴细胞亚群的分析[J].上海医学,2012,35(4):316-319.

[10] 陈应泰,王成锋,何明彦,等.低剂量重离子束照射对胰腺癌患者外周血淋巴细胞亚群比例和细胞因子表达的影响[J].中华肿瘤杂志,2014,36(6):435-439.

[11] Hiroyuki M,Kazuya M,Katsuhiko U. A case of pancreatic carcinoma with suspected autoimmune pancreatitis[J].Clinics in Gastroenterology,2009,(02):59-63

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